一、 實驗原理
慢病毒表達載體包含了包裝、轉染、穩定整合所需要的遺傳信息。慢病毒包裝質?？商峁┧械霓D錄、包裝、重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產生高滴度的病毒顆粒，需要利用表達載體和包裝質粒同時共轉染細胞，在細胞中進行病毒的包裝。包裝好的假病毒顆粒分泌到細胞外的培養基中。離心收集上清液后，可以直接用于宿主細胞的感染，目的基因進入到宿主細胞之后，經過反轉錄，整合到基因組，從而高水平的表達效應分子。
二、應用簡介
慢病毒（Lentivirus）載體是以HIV-1病毒為基礎發展起來的基因研究載體，區別于逆轉錄病毒載體，它對于分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能力。
實驗平臺的慢病毒系統屬于第三代慢病毒系統，生物安全性高，采用VSVG包膜，宿主范圍廣泛，慢病毒滴度高，其病毒滴度可以達到10^9TU/mL。
目前的慢病毒載體有CMV、mCMV、CAG、PGK、UbC、EF1a、GFAP、NSE等多種啟動子可供選擇；而且還有EGFP、ZsGreen、tdTomato、mCherry、EYFP等多種熒光標記蛋白可供選擇；抗生素篩選基因有Puromycin、Neomycin、Hygromycin等可供選擇。
在細胞實驗中，對于按常規方法難以轉染甚至無法轉染的細胞，通過使用病毒介導的方式能夠大大提高基因的轉導效率，達到目的基因高效表達的目的。
具體來說，慢病毒包裝主要應用于以下幾個方面：
1、對于難轉染的細胞，如原代細胞、干細胞、不分化的細胞等，能大大提高目的基因轉導效率，而且目的基因整合到宿主細胞基因組的幾率大大增加，極大地方便了RNAi，cDNA克隆以及報告基因的研究；
2、進行穩轉細胞株的篩選；
3、為活體動物模型實驗提供高質量的包含目的基因的病毒液。
三、 實驗方法
四、樣本送檢要求
五、案例展示
六、常見問題
1．慢病毒理論上可以包裝5～7Kbp的片段，但過大的片段包裝會影響病毒的出毒效率，導致獲得的病毒滴度較低，影響病毒感染效果。因此一般建議最好將包裝的片段控制在1.5Kbp以內。
2．病毒載體易突變和丟失，克隆過程中可能出現質粒的包裝信號突變或大小不等的片段丟失，導致無法成功包裝出病毒。因此建議構建好含有目的基因的克隆載體(尤其插入片段大于1.5Kbp)后首先進行測序，以確保關鍵序列都正確無誤。
3．包裝細胞多選擇為293T或293FT。要求細胞生長旺盛、狀態良好，避免過密生長和體外傳代次數過多。
4．轉染時對質粒純度要求較高，最好為去掉內毒素的超螺旋質粒，以提高轉染效率。多采用磷酸鈣轉染方法，既節約成本又可獲得高的轉染效率(一般可達到80％～95％)。
5．無論是三質?；蛩馁|粒慢病毒系統，轉染的各質粒之間的比例非常重要，直接影響出毒效率。不同公司提供的質粒有所差別，因此無法一概而論，需要根據給出的比例進行調整優化。
6．轉染前，細胞密度控制在50％～60％為佳。轉染前4～8h換液，轉染后不換液。轉染第2天添加丁酸鈉(TPA)可明顯提高出毒率，之后8h再換液。每次換液前應將培養基預熱至37℃，換液時動作輕柔以防細胞漂起。
7.一般情況下，轉染48h后收獲得到的病毒顆粒最多，但也與當時細胞狀態、生長速度和培養基pH值有關。收獲病毒時培養基應呈紅色，若過酸呈現黃色則會降低病毒收獲率。
8.不同廠家和批次的血清對病毒的產量影響很大，需要篩選。
9．病毒液避免反復凍融，否則明顯降低效率。
10．一般情況下，病毒液于-80℃中可保存1年，但建議半年之后重新檢測病毒滴度。
七、服務流程
病理學檢測
分子生物學檢測
免疫學檢測服務
細胞實驗服務
動物實驗平臺
