一、 實驗原理
細胞增殖是細胞在周期調控因子的作用下，通過DNA復制 、RNA轉錄和蛋白質合成等一系列復雜反應而進行的分裂過程，是生物體生長、發育、繁殖和遺傳的基礎。細胞增殖檢測廣泛應用于分子生物學、免疫學、腫瘤生物學、藥理學等研究領域，是評價細胞代謝、生理和病理狀況的重要方法。目前，常用的方法包括胸腺嘧啶核苷滲入法 、MTT檢測法、羥基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺脂 （CFSE）檢測法等。但最直接精確的就是利用胸腺嘧啶核苷酸類似物檢測新合成的DNA，即５‐乙炔基‐２′脫氧尿嘧啶核苷（５‐ethynyl‐２′‐deoxyuridine，EdU）和 ５‐溴‐２′‐脫氧尿嘧啶核苷（５‐bromo‐２′‐deoxyuridine，BrdU）標記。
BrdU是另一種嘧啶類似物，其化學結構特點是溴替代了胸腺嘧啶環與5位C原子連接的甲基，可競爭性摻入到S期新合成的DNA中，利用免疫熒光技術標記增殖細胞，如同時結合其他細胞標記物進行雙重染色，可判斷細胞種類及增值速度，對研究細胞動力學有重要意義。
EdU是一種胸腺嘧啶核苷的類似物，其化學結構特點是脫氧胸腺嘧啶環上與５位C原子相連的甲基被乙炔基取代，在S期細胞增殖時可作為底物摻入到正在復制的DNA鏈中， 通過與染料的共軛反應可以進行高效快速的細胞增殖檢測，其中，乙炔基能夠與一種熒光標記的小分子疊氮化合物探針反應，形成穩定的三唑環，該反應是一種被稱“click”化學作用的Cu＋催化的環加成作用。EdU的［3+2］環加成 作用由Cu＋催化完成，由于Cu＋鹽的低溶解度，Cu＋通常以配基的形式引入到［3+2］環加成作用之中。
二、應用簡介
目前，BrdU標記新合成DNA的方法在動物細胞組織的腫瘤生物學、遺傳學、分子生物學等領域得到廣泛應用。
與傳統的免疫熒光染色比較，EdU反應非?？焖?，能在幾分鐘內完成，且不需要進行DNA變性處理，只需簡單的幾個步驟，使得組織成像更簡單易行，因此也適用于高通量篩選試驗，尤其適合進行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他藥物的篩選實驗。
三、實驗方法
四、樣本送檢要求
五、案例展示
六、常見問題
1、BrdU配制方法：10mg容于10ml雙蒸水，4℃避光保存。
2、BrdU會對肌體造成不可逆損傷，使用時注意安全，避免吸入BrdU粉塵。
七、服務流程
病理學檢測
分子生物學檢測
免疫學檢測服務
細胞實驗服務
動物實驗平臺
