一、實驗原理
穩轉株即穩定表達細胞株，指的是基于某一細胞系構建的持續過表達或干擾某特定基因的細胞系。慢病毒感染-藥物篩選法是目前廣泛應用的穩轉株構建方法，具有高效整合、目標細胞廣泛等特點。
將外源DNA克隆到具有某種抗性的載體上，載體被轉染到宿主細胞并整合到宿主染色體中，用載體中所含的抗性標志進行篩選。最常用的真核表達載體的抗性篩選標志物有新霉素（neomycin）、潮霉素（hygromycin）和嘌呤霉素(puromycin)，篩選得到可穩定表達目的蛋白，或者穩定表達沉默特定基因的細胞株。
二、應用簡介
穩轉株主要應用于以下研究中：
1、需要長期在目的細胞中研究基因功能。通過構建穩定株，可以大大降低頻繁轉染或者病毒包裝的成本，也方便長期的實驗研究；
2、部分蛋白半衰期及長，瞬時RNA只能干擾表達，無法去除已經表達的目的蛋白，通過構建穩定株可以實驗更好的基因干擾效果；
3、瞬轉會引入不可預期的拷貝數表達（往往瞬時表達較高），導致因為人為因素造成實驗結果的不精確，構建穩定株可以幫助篩選到拷貝數適量的細胞進行實驗研究；
4、穩轉株可以用于誘導表達系統的實驗，用于控制基因的時空表達；
5、需要用目的細胞構建動物模型的實驗，往往需要構建成穩定株。
三、實驗方法
1、目的細胞的合適抗生素濃度篩選；
2、目的細胞的合適病毒滴度篩選；
3、慢病毒構建與包裝與滴度測定；
4、慢病毒感染；
5、特定抗生素篩選穩轉細胞株；
6、穩轉細胞株鑒定。
四、樣本送檢要求
五、案例展示
多克隆穩轉株
單克隆穩轉株
六、常見問題
1.支原體污染問題
由于輕度的支原體污染并不影響細胞的生長和增殖，故被許多實驗室所忽略。但支原體易在病毒感染細胞后爆發，出現大量細胞碎片，甚至導致細胞死亡，導致穩轉株篩選的失敗。我們建議在穩轉株構建之初，務必排除細胞及培養環境中的支原體污染。
2.其他問題
除支原體污染之外，還有以下問題會經常出現于穩轉株構建中。
七、服務流程
病理學檢測
分子生物學檢測
免疫學檢測服務
細胞實驗服務
動物實驗平臺
