一、 實驗原理
克隆形成實驗是腫瘤細胞學研究中的一種常用技術，其原理是將細胞分離成單細胞懸液，在培養基上接種培養，根據集落形成數量和大小來檢測細胞增殖能力和致瘤性。該實驗可用來研究腫瘤細胞的增殖能力、侵襲性，探討細胞對不同殺傷因素的敏感性。
根據培養基是否需要軟瓊脂，克隆形成實驗可以分為平板克隆形成實驗（PCF）和軟瓊脂克隆形成實驗（SACF）。PCF是直接將細胞接種于培養瓶、培養皿中，優點為操作簡便、細胞間分泌的促生長因子可在培養液中擴散、克隆形成率高，適用于貼壁生長的細胞;缺點為細胞在 貼壁前易于移動。SACF是采用半固體培養基模擬體內生長環境，適用于懸浮細胞及不依賴于貼壁生長的腫瘤細胞。在懸浮狀態下不能增殖的細胞（如正常成纖維細胞）不適用此法。
軟瓊脂克隆形成實驗主要用于非貼壁生長的細胞，某些細胞（如正常成纖維細胞）在懸浮狀態下不能增殖，不適用于此法。某些惡性腫瘤細胞，不僅在貼壁狀態下能增殖，在懸浮狀態下能增殖，其在軟瓊脂中形成克隆的能力反映了惡性程度，這種方法可用于細胞分化的基礎研究和臨床腫瘤治療的療效檢驗等方面。讓細胞處于不貼壁以及單細胞狀態，模擬體內細胞處于半固液態的情況，在此狀態下檢測細胞的增殖能力。單細胞處于soft agar中，就如胰酶消化后的狀態，及圓形，此后細胞繼續增殖、分裂，形成單克隆球形。半固體環境肯定是要求惡性程度高的容易生長，所以不會比平板克隆快，只要能夠和對照比較即有意義。
克隆形成試驗是測定細胞增殖能力的有效方法之一，貼壁后的細胞不一定每個都能增殖和形成克隆，而形成克隆的細胞必為貼壁和有增殖活力的細胞。細胞克隆形成率表示接種細胞后貼壁的細胞成活并形成克隆的數量，可以反映細胞群體依賴性和增殖能力兩個重要性狀。
二、應用簡介
軟瓊脂克隆形成實驗可用于：
①細胞分化的基礎研究；
②臨床腫瘤治療的療效檢驗等方面。
當單個細胞在體外增殖6代以上，其后代所組成的細胞群體，成為集落或克隆。
平板細胞克隆適用于貼壁生長的細胞和正常培養的細胞可用于：
①細胞增殖實驗
②細胞群體依賴性檢測
三、實驗方法
四、樣本送檢要求
五、案例展示
DU145細胞克隆形成的圖片（相機左，顯微鏡右）
六、常見問題
平板克隆實驗
1）平板克隆形成實驗方法簡單，適用于貼壁生長的細胞。適宜底物為玻璃的、塑料瓶皿。
2）實驗成功的關鍵是細胞懸液的制備和接種密度。細胞一定要分散得好，不能有細胞團，接種密度不能過大。
3）細胞在進行克隆形成實驗時要求有95%以上的分散度，否則結果的準確度會受到很大影響。
4）一般初代培養細胞克隆形成率弱，傳代細胞系強；二倍體細胞克隆形成率弱，轉化細胞系強；正常細胞克隆形成率弱，腫瘤細胞強。
軟瓊脂培養克隆形成試驗
1）軟瓊脂克隆的操作相對復雜，在實驗過程中一定要注意無菌操作。
2）在將瓊脂于培養基混勻時，要注意瓊脂溫度，而且動作要迅速，避免局部結塊。
3）制備好底層瓊脂后，要待其完全凝固后再澆上上層瓊脂。
4）通常下層1.2% Argrose快些鋪，略有不平是沒有太大關系的，上層0.7% Argrose與細胞混合時水浴不大于40度，小心均勻的鋪，37度不會那么快凝固，孵箱里過幾天就好了。
5）軟瓊脂克隆形成試驗方法簡單，適用于不貼壁生長的細胞。適宜底物為玻璃的、塑料瓶皿。試驗成功的關鍵是細胞懸液的制備和接種密度。細胞一定要分散得好，不能有細胞團，接種密度不能過大，接種細胞的密度每平方厘米不超過35個，一般6cm的平皿接種1000個細胞。
6）軟瓊脂培養法常用檢測腫瘤細胞和轉化細胞系，正常細胞在懸浮狀態下不能增殖，不適用于軟瓊脂克隆形成試驗。
七、服務流程
病理學檢測
分子生物學檢測
免疫學檢測服務
細胞實驗服務
動物實驗平臺
