一、實驗原理
Matrigel是從小鼠EHS肉瘤中提取的基質成分，含有LN、IV型膠原、接觸蛋白和肝素硫酸多糖，鋪在無聚乙烯吡硌烷酮的聚碳酸酯濾膜上，能在DMEM培養基中重建形成膜結構，這種膜結構與天然基質膜結構極為相似。
濾膜孔徑一般為8um，而且膜孔都被Matrigel覆蓋，細胞不能自由穿過，必須分泌水解酶，并通過變形運動才能穿過這種鋪有Martrigel的濾膜，這與體內情況較為相似。
鋪有Martrigel的濾膜放在以Blind Well腔或MICS腔上下室之間，鋪有Martrigel面朝向上室，在下室中加有趨化劑，如一定濃度的LN、FN或小鼠3T3條件培養液或人睪丸上皮成纖維細胞培養液，上室加入重懸的瘤細胞，具有侵襲能力的細胞在趨化劑誘導下開始穿膜運動。細胞穿膜所用的時間與Martrigel的用量有關，選擇25ugMartrigell鋪膜，16小時后觀察結果較為合適。穿過濾膜的細胞多數粘附在濾膜下表面，可用棉簽將上表面的細胞拭去，然后用乙醇固定濾膜，PE染色，在光鏡下觀察統計穿過Martrigel的細胞數。另外用Transwell小室也可進行重建基質膜侵襲分析，這一方法是在Transwell小室吊籃式上腔的濾膜上鋪上30ugMartrigel，加入細胞72h后觀察結果。值得注意的是，細胞在TransWll腔中培養72小時后，有相當數量穿過濾膜的細胞不再粘附在濾膜下表面，而是脫落進人下腔溶液中．因此統計穿過基質膜的細胞數目時應把這部分細胞考慮在內。腫瘤細胞穿過重建基質膜的能力與它的體內侵襲轉移能力表現出較好的相關性，可以用重建基質膜模型初篩抗侵襲藥物。
在上述分析中，如果不在膜上鋪Martrigel而直接將8um孔徑濾膜安放在侵襲腔室上下腔室之間，細胞通過變形運動穿過濾膜，用這種模型對分析細胞運動能力和藥物對細胞運動能力的影響。另外，在下室中加有LN或FN或在濾膜下表面鋪上LN或FN，可分析藥物對腫瘤細胞的趨化性或趨固性的影響。
二、應用簡介
腫瘤細胞通過膜表面特定受體與基質或基底膜的層粘連蛋白、纖維連接蛋白和IV型膠原等相粘連，然后腫瘤細胞可釋放蛋白水解酶或激活基質中已存在的酶原，使基質成分降解，最后腫瘤細胞運動而充填到被水解了的基質的空隙處，如此三個過程不斷重復腫瘤細胞不斷向深層侵襲。
腫瘤細胞侵襲實驗（TumourInvasionAssay）可應用于：
（1）研究各種細胞因子對惡性腫瘤細胞侵襲和轉移的影響；
（2）一些抑制血管生成的新藥研究；
（3）研究腫瘤細胞侵襲和轉移機制。
三、實驗方法
Step1：制備條件培養基
Step2：包被基底膜
Step3：水化基底膜
Step4：接種細胞
Step5：培養細胞
Step6：固定及染色
Step7：鏡檢
四、樣本送檢要求
五、案例展示
圖一
圖二
六、常見問題
1、24孔板下室一般加入600ul的培養基，特別注意的是，下層培養液和小室間常會有氣泡產生，一旦產生氣泡，下層培養液的趨化作用就減弱甚至消失了，在種板的時候要特別留心，一旦出現氣泡， 要將小空提起，去除氣泡，再將小室放進培養板；
2、接種的細胞應選擇處于對數生長期且狀態良好，細胞計數需準確；
3、待細胞遷出，且形態展開后即可固定染色；
4、染色后，可用棉簽輕輕擦掉上層未遷出細胞；
5、拍照時，同一視野不可重復拍照，膜上小孔清晰，細胞形態明顯，所有照片的背景需統一。
七、服務流程
病理學檢測
分子生物學檢測
免疫學檢測服務
細胞實驗服務
動物實驗平臺
