一、實驗原理
Western Blot與Southern印跡雜交或Northern印跡雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。經過PAGE分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素膜NC膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與酶或同位素標記的第二抗體起反應， 經過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術也廣泛應用于檢測蛋白水平的表達。其圖解為：
Western Blot顯色的方法主要有以下幾種：i.放射自顯影ii.底物化學發光ECL iii.底物熒光ECF iv.底物DAB呈色?，F常用的有底物化學發光ECL和底物DAB呈色，體同水平和實驗條件的是用第一種方法，目前發表文章通常是用底物化學發光ECL。只要買現成的試劑盒就行，操作也比較簡單，原理如下（二抗用HRP標記）：反應底物為過氧化物+魯米諾，如遇到HRP，即發光，可使膠片曝光，就可洗出條帶。
二、應用簡介
Western blot法應用分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中時常會用到的一種實驗方法，并且是一種能對蛋白進行定性和半定量的分析方法。是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色，并且通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中的表達情況的信息。
三、實驗方法
四、樣本送檢要求
五、案例展示
六、常見問題
其他問題?
（1）蛋白分子量偏高或者偏低?？赡苁悄z的濃度與目的蛋白的濃度不對應。?
（2）蛋白質降解。蛋白質降解后很可能會在比原來位置低的地方出現主帶，然后會出現一些其他帶，最主要特點是所有的條帶比正常的都低，并且條帶模糊不清晰。?
（3）所有條帶連成一片沒有間隔。原因最可能是上樣量過多，其次是樣品彌散（比如電泳長時間停止樣品彌散）。?
（4）整個條帶呈?“?︶?”?狀：凝膠冷卻不均一，電泳槽老化。?
（5）整個條帶呈“?︵?”：?凝膠左右兩頭沒有凝固好。?
（6）溴酚藍拖尾：樣品溶解不好。?
（7）縱向的紋理：上樣樣品中存在不溶性顆粒。?
（8）溴酚藍很粗：濃縮膠濃縮效果不好，可能是濃縮膠太短，或者是濃縮膠配錯。?
（9）在分離膠中跑不動：Tris-HCl?PH值不對，或者忘記加SDS。
七、服務流程
病理學檢測
分子生物學檢測
免疫學檢測服務
細胞實驗服務
動物實驗平臺
