一、實驗原理
利用熒光素酶與底物結合發生化學發光反應的特性，把感興趣的基因轉錄的調控元件克隆在螢火蟲熒光素酶基因（firefly luciferase）的上游， 構建成熒光素酶報告質粒。然后轉染細胞，適當刺激或處理后裂解細胞，測定熒光素酶活性。通過熒光素酶活性的高低判斷刺激前后或不同刺激對感興趣的調控元件的影響。
同時，為了減少內在的變化因素，比如：培養細胞的數目、細胞轉染和裂解的效率等對實驗準確性的影響，將帶有海腎熒光素酶基因（Rinilla luciferase）的質粒（phRL-TK）作為對照質粒與報告基因質粒共轉染細胞，提供轉錄效率的內對照，使測試結果不受實驗條件變化的干擾。
在測量過程中，首先加入熒光素酶檢測試劑Luciferase Assay Reagent II時產生螢火蟲熒光信號，這樣先測量螢火蟲熒光素酶活性。定量螢火蟲熒光強度之后，再在同一樣品中加入Stop&Glo Reagent試劑，將上述反應淬滅，并同時啟動海腎熒光素酶反應，進行第二次測量，稱之為雙熒光素酶報告基因實驗。
二、應用簡介
雙熒光素酶實驗通常用于以下研究方向:驗證miR同mRNA靶向互作。將待測mRNA的預測靶向序列插入報告基因載體，再共轉入該miR mimics，如果熒光素酶活性下降，則提示為其靶序列。驗證miR同lncRNA靶向互作。將候選的lncRNA預測靶向序列插入報告基因載體中F-Luc的3’UTR區域，檢測熒光素活性。啟動子結構分析。將啟動子區域序列（通常2k左右）進行分段截短，或對特定位點進行突變，再分別構建入luciferase報告載體中替換啟動子序列，檢測其啟動子活性。驗證特定轉錄因子同其調控序列的作用。將該序列（通常為啟動子區域）插入報告基因載體，同時在實驗細胞中共轉過表達該轉錄因子，可分析轉錄因子過表達是否提高熒光素酶活性。
報告基因(reporter gene):是一種編碼可被檢測的蛋白質或酶的基因，也就是說，是一個其表達產物非常容易被鑒定的基因。
一般的，把報告基因的編碼序列和基因表達調節序列相融合形成嵌合基因，或與其它目的基因相融合，從而利用它的表達產物來標定目的基因的表達調控。
在動物基因表達調控的研究中，報告基因被廣泛應用。如綠色熒光蛋白(GFP）和熒光素酶。
熒光素酶（Luciferase）：是能夠催化不同底物氧化發光的一類酶的統稱，哺乳細胞無內源性熒光素酶。
熒光素酶報告基因的優點
1、優越的靈敏度，比Westernbloting靈敏度高1000倍以上；
2、內源性低，哺乳動物無內源性表達；
3、熒光素酶檢測不受細胞內其他物質影響；
4、發光檢測，檢測方便；
5、靈敏度高，10‐20摩爾熒光素酶分子；
6、檢測范圍廣，大于7個數量級。
主要應用領域
1、潛在啟動子/啟動子核心區域檢測；
2、潛在增強子/抑制子等調控子核心元件檢測；
3、啟動子區可能的轉錄因子結合位點檢測；
4、啟動子/增強子與轉錄因子的相互作用；
5、病毒/細胞相互作用；
6、藥物等化學誘導因素對啟動子活性的調節（抑制或增強）；
7、射線等物理誘導因素對啟動子活性的調節（抑制或增強）。
三、 實驗方法
四、樣本送檢要求
五、案例展示
六、常見問題
1、由于溫度對酶反應有影響，所以測定時樣品和試劑均需達到室溫后再進行測定。
2、Renilla熒光素酶檢測工作液后需配制后立即使用，不可配制成工作液后長期保存。
3、Luciferase Assay Reagent II (LAR II)不能反復凍融，保證每次用同一批次的LAR II。配好的LAR II在-20度可穩定一個月，在-70度 可穩定一年。
4、試劑保存和使用時都應避光。
5、為取得最佳測定效果，測定時，樣品和測定試劑混合后到測定前的時間應盡量控制在相同時間內（1-2秒）。
6、使用過程中切勿接觸操作屏（程序會被終止或取消）。
7、平時盡量不要移動儀器，防止觸摸屏走位。
七、服務流程
病理學檢測
分子生物學檢測
免疫學檢測服務
細胞實驗服務
動物實驗平臺
