一、 實驗原理
蘇木精—伊紅染色法( hematoxylin-eosin staining )，簡稱HE染色法 ，石蠟切片技術里常用的染色法之一 。
蘇木精染液為堿性，主要使細胞核內的染色質與胞質內的核酸著紫藍色；伊紅為酸性染料，主要使細胞質和細胞外基質中的成分著紅色。
①細胞核染色原理
蘇木精為堿性天然染料，可使細胞核著色。細胞核內染色質的成分主要是DNA，在DNA的雙螺旋結構中，兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外，使DNA雙螺旋的外側帶負電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木精堿性燃料以離子鍵或氫鍵結合而被染色。蘇木精在堿性溶液中呈藍色，所以細胞核被染成藍色。
②細胞漿染色原理
細胞漿內主要成分是蛋白質，為兩性化合物、細胞漿的染色與pH值有密切關系，當pH調到蛋白質等電點4.7-5.0時，胞漿對外不顯電性，此時酸或堿性染料不易染色。當pH調到6.7-6.8時，大于蛋白質的等電點pH值，表現酸性電離，而帶負電荷的陰離子，可被帶正電荷的染料染色，現時胞核也被染色，核和胞漿難以區分。因此必須把pH調至胞漿等電點以下，在染液中加入醋酸使胞漿帶正電荷（陽離子），就可被帶負電荷（陰離子）的染料染色。伊紅Y是一種化學合成的酸性染料，在水中離解成帶負電荷的陰離子，與蛋白質的氨基正電荷（陽離子）結合而使細胞漿染色，細胞漿、紅細胞、肌肉、結締組織，嗜伊紅顆料等被感染成不同程度的紅色或粉紅色，與藍色的細胞核形成鮮明的對比。
③分化作用
染色后，用某些特定的溶液將組織過多結合的染色劑脫去，這個過程稱為分化作用，所用的溶液稱為分化液。在HE染色中用0.5%鹽酸乙醇作為分化液，因酸能破壞蘇木精的醌型結構，使組織與色素分離而褪色。經蘇木精染色后，必須用0.5%鹽酸乙醇分化，使細胞核過多結合的蘇木精染料和細胞漿吸附的蘇木精染料脫去，在進行伊紅染色，才能保證細胞核與細胞漿染色的分明。因此，在HE染色中分化是極為關鍵的一步。
④返藍作用
分化之后，蘇木精在酸性條件下處于紅色離子狀態，呈紅色，在堿性條件下處于藍色離子狀態，呈藍色。組織切片經0.5%鹽酸乙醇分化后呈紅色或粉紅色，故分化之后，立即用水除去組織切片上的酸而終止分化，再用弱堿性水（0.2%氨水）使蘇木精染上的細胞核呈現藍色，這個過程稱為返藍作用或藍化作用。另外用自來水浸洗也可使細胞核返藍，但所需時間較長。
二、應用簡介
HE染色法是組織學、胚胎學、病理學教學與科研中最基本、使用最廣泛的技術方法。常用于組織形態結構的觀察。
三、實驗方法
四、樣本送檢要求
五、 案例展示
六、 常見問題
1.切片染色不勻
1.1組織取材固定不當。
如組織取材過大或過厚，不能將組織完全固定，組織切片染色后出現外周固定好的部分易著色，而中間未固定好的組織，細胞著色模糊，使染色不均。在送檢的標本中，及時用4%中性甲醛對標本固定，固定液應是標本的4倍。大標本應切開固定。
1.2切片薄厚不均或有橫紋。
切片刀有缺口時，易造成斷裂，破碎和不完整。切片刀傾角過大上卷，不能連在一起，過小則切片皺起?；蛞蚵萁z松動產生振動切片易造成厚薄不均或技術人員手臂搖動切片機頭力量不均易造成橫紋。切片時檢查切片機螺母是否擰緊。
切片刀角度是否過大或過小即可。
1.3組織脫水，透明和浸臘處理不當
（1）組織脫水用的各級乙醇未能保證相應濃度使組織脫水不徹底
（2）二甲苯內的時間過長組織易碎也無法切出好片子。
（3）浸臘溫度過高，組織變脆也不利切片染色。
1.4染色過程處理不當
（1）組織切片脫臘不徹底，如二甲苯時間過久 ，無水乙醇不純或時間過久，室溫低，組織切片上的石蠟沒有全部除掉時，含臘部分不著色或著色過淺染色液試劑量少，組織切片沒有全部浸到 。
（2）組織切片上在撈片時有氣泡，則氣泡內組織可能染色不均。
2.切片染色模糊不清
2.1取材：
組織標本已發生自溶或取材后沒及時固定或固定液濃度不夠；另固定前干枯標本，染色后易出現灰染現象，很難補救。
2.2固定
（1）固定劑對組織有一定媒染作用，它既可與蛋白結合又能與染料結合，可增強著色能力，同時能沉淀和凝固細胞內成分，使細胞內成分產生不同折光率造成光學差異。故固定不良是造成切片染色模糊不清的主要原因
（2）在日常病理制片中淋巴結處理不當造成切片染色后組織見發灰現象，其主要原因由于細胞密集，結構復雜導致固定液難以滲透到組織深部，從而造成組織中央固定不佳，而出現徹底發灰現象?？捎玫攘繜o水乙醇乙醚混合液處理切片5-10分鐘，乙醇洗，水洗，3%硫酸鐵銨溶液補充媒染5分鐘既可。
（3）送檢標本部分用乙醇固定組織，常溫下乙醇的白蛋白，球蛋白不再溶于水，而核蛋白則可溶于水。故乙醇固定標本切片，切片染色不良，細胞質染色較差。切片出現模糊不清現象，其補救辦法液4%中性甲醛對標本再固定。
3.其他原因
3.1溫度：
包埋/切片后烤片溫度過高，均會使蛋白發生質變可能發生拒染，造成切片染色模糊不清。
3.2染料：
質量差或溶液配制不當，如配制蘇木精時加熱使氧化過度，不能生成三氧化蘇木紅生成四氧化蘇木紅使染液沒有染色能力或蘇木精使用時間過久，導致切片著色能力或蘇木精使用時間過久，導致切片著色不良，切片模糊不清。
3.3分化過度 細胞核著色淡
3.4脫水
透明不徹底：切片如在二甲苯中有白霧現象發生即表示乙醇脫水未盡，應立即返回重新脫水。否則，鏡下組織結構模糊不清。
3.5封固
（1）注意避免封片者口鼻呼出氣接觸組織上封劑。
因呼出氣體中會含水分；
（2）在潮濕環境中動作要快，以免空氣水進入封固內響質量。
七、服務流程
病理學檢測
分子生物學檢測
免疫學檢測服務
細胞實驗服務
動物實驗平臺
