一、 實驗原理
細胞黏附性是維持組織結構穩定的基本條件，也是細胞運動和發揮功能的調節因素，并且對細胞的增殖、分化有重要影響。通?？煞譃閮深?，即細胞與細胞黏附和細胞與基質黏附。機體內許多細胞，如上皮細胞，需要牢固地定在某處發揮功能；另一些細胞，如白細胞，活躍運動，就需要不斷調節細胞黏附。細胞黏附性的改變在腫瘤轉移過程中也發揮著重要作用。惡性腫瘤具有從原發瘤分離及在體內擴散的能力，提示這些細胞在相互識別及黏附機制方面發生了改變。
二、應用簡介
細胞粘附分子(cell adhesion molecules，CAMs) 是一類膜表面糖蛋白，它們以配體－受體特異性結合的方式介導細胞與細胞間、細胞與細胞外基質間的相互接觸和結合并調節細胞功能，在胚胎發育和分化、正常組織結構的維持、炎癥反應、免疫應答、凝血和血栓形成、創傷修復、腫瘤浸潤與轉移等許多生理和病理過程中發揮重要的生物學作用。
細胞粘附實驗通常分為兩類，即細胞與細胞粘附和細胞與基質粘附。機體內許多細胞，如上皮細胞固定在某處發揮功能；另一些細胞，如白細胞，活躍運動，就需要不斷調節細胞粘附。細胞粘附性的改變在腫瘤轉移過程中也發揮著重要作用。惡性腫瘤具有從原發瘤分離及在體內擴散的能力，提示這些細胞相互識別及粘附機制發生了改變。用到測定細胞粘附性的實驗有：機械法測定細胞粘附性，發射性核素法測定細胞粘附性，細胞分離實驗和腫瘤細胞聚集體形成實驗。
三、 實驗方法
1、將4.5×105個Hep3B細胞/孔傳代于無菌6孔培養板中。
2、培養24h后，用Lipofectamine?TM?2000將37LRP?siRNA轉染Hep3B細胞（兩個平行孔，Lipofectamine?TM?2000轉染具體操作見方法7），轉染后的細胞置37℃、5％CO2培養箱培養，48h后收集細胞。同時各有兩個平行孔的細胞進行陰性對照轉染及不行轉染。轉染終濃度即siRNA終濃度為100nmol/L。?
3、培養48小時后收集細胞，用0.25%胰酶將貼壁培養細胞（約1×106個）從壁上消化下來并制成單細胞懸液。?
4、用無血清MEM培養基將Matrigel配制成10ug/250ul（1:300）的人工基底膜膠備用。
5、96孔板每孔中鋪Matrigel?2ug/50ul，放于超凈臺中風干過夜。?
6、96孔板每孔加入適量無血清MEM細胞培養液(或PBS或生理鹽水)，放置60－90分鐘，洗去多余的膠；?
7、取轉染、陰性對照轉染及不行轉染的Hep3B細胞以4×103/孔接種在鋪膠的96孔板中，設3個重復孔，放入37℃、5％CO2培養箱中分別培養20min、40min、60min。?
8、在相應時間點取出96孔板，吸出培養液，用PBS洗3遍，洗去未粘附細胞。
9、每孔加入100?ul甲醇，固定15min。?
10、每孔加入100?ul姬姆薩染液，染色15min，蒸餾水洗去染液。?
11、在200倍顯微鏡下計數粘附細胞數量（每孔在固定位置取8個視野）
四、樣本送檢要求
五、案例展示
六、常見問題
1、細胞處理需要小心操作，盡量避免人為的損傷細胞。離心力在不損失細胞的前提下盡可能小，重懸細胞是動作要輕柔，避免多次反復的激烈吹打，不用渦旋振蕩器。
2、染色培養時間根據細胞種類的不同和每孔內細胞數量的多少而異。一般情況下，白細胞較難染色，因此需要較長的培養時間。培養時間一般為1-?4小時，但在培養30分鐘左右即可取出肉眼觀察。
3、染色程度?(根據細胞種類而定，需要摸索一下條件)。當使用標準96孔板時，貼壁細胞的最小接種量至少為1,000個/孔?(100μl培養基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2,500?個/孔?(100μl培養基)。如果要使用24孔板或6孔板實驗，請先計算每孔相應的接種量，并按照每孔培養基總體積的10%加入染色液B。?
4、有條件的情況下建議采用多通道移液器，可以減少平行孔間的差異。加染色液B試劑時，建議斜貼著培養板壁加，不要插到培養基液面下加，容易產生氣泡，會干擾OD值讀數。?OD值在0.4-2.0之間均可，最大值控制在1.0左右為宜，小于0.4或大于2.0請調整接種量和培養時間。?
七、服務流程
病理學檢測
分子生物學檢測
免疫學檢測服務
細胞實驗服務
動物實驗平臺
