一、實驗原理
細胞劃痕法是簡捷測定細胞遷移運動與修復能力的方法，類似體外傷口愈合模型，在體外培養皿或平板培養的單層貼壁細胞上，用微量槍頭或其他硬物在細胞生長的中央區域劃線，去除中央部分的細胞，然后繼續培養細胞至實驗設定的時間，取出細胞培養板，觀察周邊細胞是否生長至中央劃痕區，以此判斷細胞的生長遷移能力，實驗通常需設定正常對照組和實驗組，實驗組是加了某種處理因素或藥物、外源性基因等的組別，通過不同分組之間的細胞對于劃痕區的修復能力，可以判斷各組細胞的遷移與修復能力。
二、應用簡介
細胞遷移：也成為細胞移動、細胞爬行或細胞運動，是細胞在接受遷移信號或感受到某些物質的梯度后而產生的移動。
細胞遷移參與到很多生理和病理的活動中，如下：
1. 免疫：如淋巴細胞的定向遷移是其分化成熟和發揮功能的關鍵之一；
2. 炎癥：炎癥反映最重要的功能是將白細胞送到炎癥灶，白細胞遷移到炎癥部位并發揮其吞噬和組織損傷作用；
3. 腫瘤轉移：遷移是腫瘤細胞轉移過程中必不可少的環節之一。腫瘤細胞與母體瘤分離，穿越血管壁，侵襲周邊正常組織時，需要一定的運動能力。高轉移的腫瘤細胞通常具奮較強的運動性。多種物質可剌激腫瘤細胞的遷移，如腫瘤細胞分泌因子、生長因子、細胞外基質成分(FN、LN)以及一些癌轉移靶器官的代謝產物或分泌產物等生長因子對腫瘤細胞有趨化作用，可使其發生定向運動。測定方法以細胞劃痕法和Transwell小室法；
4. 損傷修復：當機體發生損傷時，免疫細胞和血小板會遷移到損傷部位，參與消炎和凝血；
5. 胚胎發育：胚胎期不同類型祖細胞遷移至特意靶位以保證各組織、器官的正常發育。
三、實驗方法
Culture Insert方法
1.準備細胞，培養液，culture Insert。
2.如圖，將細胞接種于Dish中間的Insert，細胞長滿Insert區域后用鑷子移除Insert即可產生500μm寬度的劃痕。
3.每隔4-6小時拍照記錄。
4.根據收集圖片數據分析實驗結果。
傳統實驗方法
1.培養板劃線
首先使用marker筆在6孔板背后，用直尺比著，均勻的劃橫線，大約每隔0.5~1cm一道，橫穿過孔。每孔至少穿過5條線。劃線時注意線不要太粗 。
2.鋪細胞
在孔中加入約5×105個細胞（不同的細胞數量有所不同，根據細胞的生長快慢調整），接種原則為過夜后融合率達到100%。
3.細胞劃線
第二天用槍頭或者無菌牙簽，垂直與細胞平面，沿著投一天劃在平板背面的線在細胞層上進行劃痕(不同孔之間最好使用同一只槍頭或牙簽)。
4.洗細胞
劃痕完成后，使用無菌PBS洗細胞3次，洗去不貼壁的細胞，即劃線時劃線的細胞，是劃線后留下的間隙清晰可見，然后更換新鮮無血清培養基。
5.細胞培養、觀察
將細胞放入37℃ 5% CO2培養箱，培養。然后在適當的時間點，如0，6，12，24h取出細胞，顯微鏡線觀察并測量劃痕的寬度，并拍照(具體時間依實驗需要而定)。
四、樣本送檢要求
五、案例展示
六、常見問題
1.鋪細胞最好使用6孔板，因為6空板可以保證有相當距離的平直劃痕，而且因為有5條定位線，與劃痕相交，這樣就有10個可固定監測點，不作重復，誤差也很小。當然若是需要高通量初篩時，也可以用12或24孔板。
2.如果你連續監測24小時，你需要考慮到劃痕縮小是細胞遷移和細胞繁殖共同作用的結果，而不是單純的細胞遷移。如果你要單純的考慮細胞遷移，你可以先用絲裂霉素（1 μg/ml）處理一小時，抑制細胞的分裂，這樣你的結果就是細胞遷移的作用了。另外，使用無血清培養基也可以降低增殖對實驗結果的影響。
3.照片拍完之后，可以用image J來測量劃痕區域的像素定量比較細胞遷移的速度。
4.雖然無血清培養可以忽略細胞增殖的影響，但是由于細胞內信號傳導系統整體性的下調節，細胞遷移的速度也會慢很多。
5.在用PBS緩沖液沖洗時，注意貼壁慢慢加入，以免沖散單層貼壁細胞。
6.為了避免細胞數量和狀態受到影響，盡量不要用吸泵，可用移液槍緩慢吸走。
七、服務流程
病理學檢測
分子生物學檢測
免疫學檢測服務
細胞實驗服務
動物實驗平臺
